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当基因转入破坏生物体基因组内某个基因后,观察由此引起的表型变化,同样也可认识基因的功能,这是基因剔除(gene knock-out)。基因剔除是用DNA重组技术剔除或破坏生物体基因组内某一特定基因,而后观察由此引起的表型改变。这样,可以了解该基因的生物学功能。现以小鼠为例,先将待剔除的基因制成缺失突变型,在缺失的位置上插入一个选择基因如新霉素抗性基因(neo),同时再接上另一个选择基因如胸苷激酶基因(tk)。将这一段带有已失去原有功能的待剔除基因的DNA片段装在载体上,转入在体外培养的小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES cells)。在细胞内,通过同源重组将基因组里有功能的待剔除基因置换掉,也就是被剔除了。因为转入的外源DNA片段只有通过同源重组整合进基因组时,方能把片段上连接在待剔除基因旁边的选择基因丢掉。非同源重组也就是随机整合,则会把整个外源DNA片段包括已失去功能的待剔除基因序列和两个选择基因,全部插入ES细胞的基因组。此时,在体外培养ES细胞时,在培养液里加入针对两个选择基因的适当的化学物质,就可使随机整合(此时整个外源DNA包括neo和tk基因都被整合)而仍保留着待剔除基因的ES细胞被选择性地杀死;只有发生了同源重组(此时,tk基因不被整合)使待剔除基因被置换或剔除掉的ES细胞,方能选择性地存活下来。然后将这些存活的ES细胞注射进小鼠早期胚胎。由于ES细胞是二倍体细胞,所以已经剔除了待剔除基因的ES细胞是该基因的杂合子,也就是ES细胞的一对同源染色体中只有一条染色体上的等位基因被剔除了。所以这种ES细胞注入小鼠胚胎后产下的小鼠也是该基因的缺失杂合体,需要把同是该基因缺失杂合体的雌雄小鼠交配,从子代中选出该基因缺失的纯合体,其概率为四分之一。这些缺失纯合小鼠可用于研究鉴定被剔除基因的生物功能。
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*[nɒk]\nn. 敲, 敲打, 敲门\nvt. 敲击, 互撞, 攻击\nvi. 敲击, 互撞, 攻击\n【医】 叩音\n相关词组:\n get the knock\n knock about\n knock sb about\n knock sth back\n knock sth down\n knock sb down for\n knock it off\n knock into sb\n knock sth off\n knock on\n knock sb off\n knock sb off his feet\n knock out\n knock oneself out\n knock sb up\n knock sb out\n knock sth up\n knock sth over\n knock over\n knock together\n knock up against\n take the knock\n knock sb flat
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